1. PCR。
2. 克隆。
3. 长片段扩增或困难模板扩增。
4. 高通量PCR。
核酸内切酶活性:50μl反应体系中,10 U本酶与0.2 mM dNTPs和1 μg的pUC19质粒于37°C温育4小时,<10%的pUC19质粒由超螺旋变为缺刻状态。
7.5 kb基因组DNA PCR扩增:50 μl反应体系,1× Robust fusion HF缓冲液,50 ng基因组DNA,1 U Robust fusion DNA聚合酶,200 μM dNTPs和1 μM引物,30个循环PCR扩增出7.5 kb目的片段。
20 kb λDNA PCR扩增:50 μl反应体系,1× Robust fusion HF缓冲液,10 ng λDNA,1 U Robust fusion DNA聚合酶,200 μM dNTPs和1 μM引物,22个循环PCR扩增出20 kb目的片段。
1. Breslauer, K.J. et al. (1986) Predicting DNA duplex stability from the base sequence. Proc Natl Acad SciUSA, 83, 3746-3750.